复合通用CD4+Th细胞表位基因的原核表达及免疫学特性

摘要：

目的 构建复合通用CD4Th细胞表位基因的原核表达载体,检测表达蛋白的免疫学特性,并探讨其作为载体蛋白的可能性.方法 以限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒pUC19-Pep10,回收长度为650 bp左右的目的 片段.插入原核表达载体pQE30中,获得重组质粒pQE30-Pep10,转化大肠杆菌M15后进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Westem blot分析后,进行亲和层析纯化及透析复性,获得重组蛋白Pep10,将Pep10和TT分别免疫雌性BALB/c小鼠,以间接ELISA法和流式细胞术分别检测其免疫原性和淋巴细胞增殖效应.结果 SDS-PAGE显示重组蛋白Pep10相对分子质量约为23 000,表达量达41%,主要以包涵体形式表达,Western blot检测可见特异性染色条带,纯化后纯度达94%,共获得42 mg重组蛋白.其体外淋巴细胞增殖效应与TT相当,增殖指数分别为4.216和4.736,而免疫原性远低于TT,特异性IgG几何平均滴度(GMT)分别为1:15 758.65和1:67 558.81.结论 已成功构建重组原核表达载体pQE30-Pep10,并在大肠杆菌中高效表达,且表达的重组蛋白Pep10具有良好的淋巴细胞增殖效应和较低的免疫原性,有可能作为一种新型载体蛋白,用于多糖结合疫苗的研制.

关键词：CD4+Th细胞表位、原核表达、免疫原性、载体蛋白

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2008-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：452-456