抗人ICAM-1单链抗体表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的 构建抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单链抗体(ScFv)的表达载体,并在大肠肝菌中表达.方法 从分泌ICAM-1单抗的杂交瘤细胞中提取RNA,用RT-PCR扩增抗体VH和VL基因,重叠延伸PCR扩增人ICAM-1-ScFv基因,将其连接到pET-22b(+)载体上,转化大肠杆菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化及复性后,检测特异性及活性.结果 序列分析表明抗ICAM-1 ScFv基因全长为744 bp,编码247个氨基酸,其中含357 bp的VH基因片段和342 bp的VL基因片段.表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的32%.经变性和复性后,纯度达80%以上,复性率达25%.Western blot和ELISA检测,ScFv均可与ICAM-1抗原特异性结合.细胞黏附试验表明ScFv能抑制ICAM-1与HSB2细胞间的黏附,其作用稍弱于亲本mAb.结论 已成功构建了抗人ICAM-1的ScFv表达载体,其表达产物具有抗体特异性和活性.

关键词：细胞间黏附分子-1、单链抗体、表达、活性

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展计划重点项目20060929;军事医学科学院创新基金

在线出版日期：2008-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：405-409