人Cu,Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性

摘要：

目的 构建人Cu, Zn-SOD基因的真核表达载体,转化毕赤酵母,并检测表达产物的稳定性.方法 根据酵母密码子偏好性,合成人Cu, Zn-SOD基因,克隆至真核表达载体pPIC9k中,转化毕赤酵母GS115.甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.优化表达条件,并检测粗酶液的稳定性.结果 经SDS-PAGE和Western blot检测,表达的目的 蛋白相对分子质量为18000左右;最佳表达条件为pH6.0,甲醇浓度1.5%,持续培养96h;目的 蛋白占分泌蛋白总量的27%,最高表达量为91mg/L;最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U/ml,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对H2O2不稳定,对温度有一定的耐受性,pH在6和8时较稳定.结论 在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu, Zn-SOD基因.

关键词：人Cu、Zn-SOD基因、真核表达、毕赤酵母、稳定性

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅资助项目20070924-02

在线出版日期：2008-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：374-377