10.3969/j.issn.1004-5503.2008.04.007
梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达
目的 在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68~410 aa)重组蛋白.方法 采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202~1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性.结果 PCR法扩增出约1 000 bp的目的 片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在.经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.结论 所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础.
梅毒密螺旋体、特异性抗原、基因克隆、表达
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Q786(基因工程(遗传工程))
2008-07-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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