携带人6Ckine/IFNγ融合基因腺病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的 构建携带人次级淋巴组织趋化因子(6Ckine)和y-干扰素(IFNy)融合基因的重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,并在真核细胞中表达.方法 RT-PCR法分别从人淋巴结和外周血单个核细胞中扩增人6Ckine cDNA和IFNT cDNA,分两步先后将6Ckine cDNA和IFN7 cDNA连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,二者之间以Xba I酶切位点相连,应用AdMax腺病毒包装系统在HEK293细胞内同源重组,构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,经扩增和纯化后感染真核细胞HepG2,并检测6Ckine/IFNy融合蛋白的表达.结果 所构建的重组腺病毒Ad-6Ckine/IFNy经扩增和纯化后,滴度为1.26×10/10IFU/ml.PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,所携带的6Ckine/IFNy融合基因能在真核细胞中得到表达,表达形式为分泌型.结论 已成功构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNy,并在真核细胞中表达,为进一步研究肿瘤的基因和免疫治疗奠定了基础.

关键词：次级淋巴组织趋化因子、y-干扰素、融合基因、腺病毒载体

所属期刊栏目：21

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家基础研究计划973计划,2004CB518801;广东省科委重大攻关项目2003A10902.黄文林,E-mail:[e-mail]通讯作者:

在线出版日期：2008-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：261-264