重组猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

摘要：

目的 原核表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行分析.方法 通过FCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF2编码382～674位氨基酸序列的基因片段,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-293表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot及ELISA鉴定.结果 成功扩增到904 bp的目的 基因.重组载体pET28a-293经双酶切鉴定及序列测定,证实构建正确.SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量与预期相符,表达量可占菌体总蛋白的66.15%.Western blot分析表明目的 蛋白具有较好的反应原性.ELISA试验证实目的 蛋白能与阳性猪源和标准HEV血清发生反应.结论 已成功构建了猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的pET28a-293原核表达载体,并得到了有效表达,为进一步建立猪源戊型肝炎的诊断方法奠定基础.

关键词：猪源戊型肝炎病毒、衣壳蛋白、原核表达、反应原性

所属期刊栏目：21

分类号：Q786;R373.2(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2005CB523005;国家自然科学基金30771609

在线出版日期：2008-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：181-184