乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达

摘要：

目的 提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达.方法 构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子.用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛选获得新生抗性细胞团PBIBeo,连续继代培养选育出用于植物源口服乙肝疫苗生产的高产细胞株.提取基因组DNA和mRNA,进行PCR和RT-PCR鉴定,Western blot鉴定HBsAg的特异性,电镜下观察纯化抗原颗粒大小,并以ELISA检测HBsAg的表达水平.结果 转化的人参细胞基因组DNA进行PCR反应,得到约700 bp的启动子基因片段.提取mRNA进行RT-PCR反应,得到约700 bp的HBsAg基因片段.Western blot分析可见相对分子质量为24 000的特异性条带.亲和层析纯化细胞表达的HBsAg抗原,电镜观察可见平均直径为32 nm的颗粒.ELISA检测结果表明pBIBeo转化细胞株HBsAg表达量比pBIBSa转化细胞株提高1～2倍.结论 人参细胞基因组已经整合了目的 基因并稳定高效表达.

关键词：乙型肝炎病毒表面抗原、人参愈伤组织细胞、表达、CaMV 35S启动子、翻译增强子

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2008-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：119-122,130