10.3969/j.issn.1004-5503.2008.02.004
沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质
目的 分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析.方法收集48h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose 阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列.结果 经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6~11及0~60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATGGSALYPLEFVVGK.结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力.
双齿围沙蛋、消化道、蛋白酶、纯化、性质
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Q556;Q936(酶)
国家重点基础研究发展规划973计划2004CCA02400;泰山学者工程资助项目
2008-05-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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