可溶性血管内皮生长因子受体2片段的表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

摘要：

目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)抑制血管内皮细胞增殖及在血管生成中的作用.方法 提取脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA,扩增KDR基因膜外1～4 结构域, 构建原核表达载体pQE40-KDR,转化E.coli M15,经IPTG诱导表达,镍离子柱亲和层析纯化后复性,用Western blot检测sKDR蛋白的表达,MTT比色法和鸡胚尿囊膜(CAM)试验分别检测其对HUVEC增殖的影响及其对血管生成的作用.结果 经RT-PCR扩增得到了1 150 bp左右的sKDR片段,并在pQE40 原核表达系统中表达了sKDR蛋白,以包涵体形式存在.纯化后蛋白电泳呈现相对分子质量50 000左右的单一条带,纯化蛋白占总蛋白的98%,蛋白含量为80 μg/ml.Western blot证实其为重组sKDR蛋白.MTT检测结果显示,sKDR可抑制血管内皮生长因子(VEGF)刺激的HUVEC增殖,并阻滞VEGF诱导的CAM血管增生.结论 已成功构建sKDR原核表达载体,并在大肠杆菌M15中获得表达,纯化的sKDR片段具有与VEGF结合的生物学功能,有望成为基因治疗肿瘤血管形成的理想靶点.

关键词：血管内皮生长因子受体2、血管生成、人脐静脉内皮细胞、鸡胚尿囊膜

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30571857;吉林省科学技术厅资助项目200505118

在线出版日期：2008-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：85-89