大肠杆菌色氨酸操纵子基因的克隆与表达

摘要：

目的 克隆并表达大肠杆菌色氨酸操纵子基因,提高其酶活性.方法 利用PCR方法,从大肠杆菌31 884基因组中直接克隆出色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pET-22b(+)中,构建重组质粒pET-22b(+)-Trp operon,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析,并测定酶活性.结果 凝胶电泳可见PCR扩增产物大小约为7 000 bp,SDS-PAGE鉴定目的蛋白分别得到了表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了2.7和3.2倍.结论 已成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-Trp operon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性在大肠杆菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础.

关键词：色氨酸操纵子、克隆、表达、酶活性

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30300010;天津市科技攻关项目033182711

在线出版日期：2008-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：30-32