甘油脱水酶α亚基基因的克隆、表达及纯化

摘要：

目的 克隆甘油脱水酶α亚基基因,构建表达载体,表达并纯化融合蛋白.方法 采用PCR技术克隆甘油脱水酶α亚基gldA基因,并将其重组到含组氨酸标签的表达质粒pET-32a(+)中.将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经金属螯合层析柱纯化,并进行Western blot分析及活性检测.结果 重组表达质粒pET/gldA经酶切鉴定及序列分析,证明构建正确.转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达,融合蛋白相对分子质量约81 000,与预期大小一致.经Western blot分析,纯化蛋白能与6-Histidine抗体产生特异性免疫反应.α亚基经检测,未显示活性.结论 已成功获得甘油脱水酶α亚基蛋白,为进一步研究其生物学性能奠定了基础.

关键词：甘油脱水酶、α亚基、克隆、表达、纯化、活性

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：辽宁省科研项目99205002

在线出版日期：2008-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：19-22