百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性片段的筛选、克隆与表达

摘要：

目的 筛选百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性的片段,并对其进行克隆及表达.方法 采用生物信息学软件对丝状血凝素分子的结构进行预测,从中筛选出具有强免疫原性的片段FHAs.经PCR扩增,T-A克隆后,构建表达质粒pET-22b(+)-FHAs,酶切鉴定正确后测序.将测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE分析及Western blot鉴定.结果 从丝状血凝素分子中筛选出具有138个氨基酸的肽段FHAs,经PCR扩增,得到约400 bp的目的基因片段,构建的重组质粒经双酶切和测序鉴定,证明质粒构建正确,重组工程菌pET-22b(+)-FHAs/BL21经IPTG诱导,目的蛋白的表达量在50%以上,主要以包涵体形式存在.Western blot分析证实该蛋白能与抗FHA单抗发生反应.结论 筛选出的肽段FHAs具有强的免疫原性和免疫反应特异性,为百日咳基因工程疫苗的研究奠定了基础.

关键词：百日咳杆菌、丝状血凝素、基因克隆、原核表达、免疫原性

所属期刊栏目：21

分类号：R516.6;Q786(传染病)

在线出版日期：2008-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：12-15