携带人白细胞介素-1受体拮抗剂基因腺病毒质粒的构建

摘要：

目的 构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因重组腺病毒质粒.方法 用EcoRⅤ和Hind Ⅲ双酶切质粒pcDNA3-hIL-1Ra,获得hIL-1Ra cDNA片段,并定向连接在pShuttle-CMV穿梭载体上,构建穿梭质粒pShuttle-CMV/h IL-IRa.经PmeⅠ酶切线性化,穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-1Ra与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,二质粒在细菌内同源重组,得到重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒.脂质体介导pAd/hIL-1Ra质粒转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染HEK293细胞扩增病毒后,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、纯度及滴度.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组pShuttle-CMV/hIL-1Ra穿梭质粒和重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒.扩增纯化后,重组腺病毒颗粒数为1.19×1011 OPU/ml,A260/A280为1.279,滴度为3.6×109 CCID50/ml.结论 已成功构建重组腺病毒质粒pAd/hIL-1Ra,为hIL-1Ra基因在腺病毒载体介导下的免疫抑制治疗研究奠定实验基础.

关键词：同源重组、腺病毒、白细胞介素-1、受体拮抗剂

所属期刊栏目：21

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2008-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-7,15