10.3969/j.issn.1004-5503.2007.04.009
百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化
目的 克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性.方法 采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段.将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达.表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 PCR及重叠延伸获得了约700 bp的目的 基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27 000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应.结论 成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础.
百日咳毒素、S1亚单位、突变体、原核表达
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Q786(基因工程(遗传工程))
2007-05-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共4页
264-266,270