结核分枝杆菌复活促进因子E的原核表达及纯化

摘要：

目的 构建结核分枝杆菌复活促进因子E(RpfE)的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化.方法 采用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfE基因,双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转化大肠杆菌Top10.阳性克隆经酶切和DNA测序鉴定正确后,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达RpfE蛋白,并对表达蛋白进行鉴定和纯化.结果 双酶切鉴定所切下的片段大小与预期相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,在相对分子质量41 000处均可见特异性蛋白条带.经Ni2+-NTA金属螯合层析后,重组蛋白纯度可达90%以上.结论 已成功地克隆并构建了RpfE基因的重组表达质粒pET32a(+)-RpfEv,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、复活促进因子E、原核表达

所属期刊栏目：20

分类号：Q786;R378.91+1(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：252-255