输血传播病毒ORF2基因的克隆和原核表达

摘要：

目的 克隆输血传播病毒(TTV)兰州株ORF2的基因,并构建原核表达载体.方法 通过巢式PCR,从一份兰州地区无偿献血员血清中扩增TTV病毒的ORF2基因,并克隆到pGEM-T载体中,进行核苷酸序列分析.然后亚克隆到高效表达质粒pET22b(+)中,构建表达载体ORF2-pET22,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF2融合蛋白.用纯化的重组ORF2蛋白作为抗原,ELISA检测人血清样本中的TTV-IgG抗体.结果 ORF2基因与日本TA287株的同源性为99.3%.用TTV-PCR阳性的血清对重组蛋白进行了Western blot,结果在表达蛋白位置处出现了特异性反应条带.以ORF2蛋白为抗原的ELISA检测结果具有较好的准确性.结论 已成功克隆了ORF2基因,并在原核细胞中表达.

关键词：输血传播病毒、ORF、克隆、原核表达

所属期刊栏目：20

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2007-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：181-183,186