人肌红蛋白基因的克隆、表达及其抗体制备

摘要：

目的 克隆、表达人肌红蛋白基因,并制备人肌红蛋白多克隆抗体.方法 应用RT-PCR方法从人骨骼肌总RNA中扩增肌红蛋白基因(hMb)编码序列,克隆入原核表达载体pRSETc中,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达.表达产物经亲和层析和凝胶层析纯化.纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用Western blot检测其特异性.结果 测序表明RT-PCR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM203377)中报道的序列一致.该基因在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化,获得电泳纯的蛋白.重组人肌红蛋白的表达水平达12.8%.每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白6.438 mg.Western blot分析表明该蛋白为融合有6个His的hMb蛋白.ELISA法测得抗体效价为1∶ 12 800,Western blot证实其具有较好的特异性.结论 已成功克隆人肌红蛋白基因,在大肠杆菌中获得了可溶性表达,并制备了抗人肌红蛋白的多克隆抗体.

关键词：肌红蛋白、基因克隆、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：20

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30300038;山西省科技攻关项目041146

在线出版日期：2007-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：166-169