幽门螺杆菌尿素酶表位疫苗的构建、表达及鉴定

摘要：

目的 构建和表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)表位串联体(Uepi)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合蛋白表位疫苗,并对其生物学及免疫学特性进行鉴定.方法 设计引物,采用PCR法分别扩增UreB表位多肽编码基因Uepi和LTB编码基因,重叠延伸PCR法将两段基因拼接,T-A克隆后,构建融合基因表达质粒pET-22b(+)-Uepi-LTB,经酶切鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行鉴定.结果 PCR扩增出206 bp和336 bp的目的片段,重叠延伸PCR扩增出524 bp的融合目的基因片段.原核表达质粒pET-22b(+)-Uepi-LTB经酶切及测序鉴定,与设计序列一致.重组工程菌pET-22b(+)-Uepi-LTB/BL21经IPTG诱导,目的蛋白表达率约25%,SDS-PAGE分析相对分子质量约20 000,目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达96%,Western blot鉴定该融合蛋白与兔抗LTB多抗血清可发生特异性结合.结论 Hp UreB表位串联体与LTB融合蛋白的表位疫苗经基因克隆,可获得高效表达,并显示出较好的免疫活性,为新一代Hp疫苗的研制奠定基础.

关键词：幽门螺杆菌、尿素酶B亚单位、大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位、表位疫苗

所属期刊栏目：20

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家科技专项基金2003AA2Z3C64;国家自然科学基金30400406

在线出版日期：2007-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：157-161