艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区片段的表达及纯化

摘要：

目的 表达并纯化艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区片段,为制备高效防治艰难梭菌感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法 提取艰难梭菌染色体基因组DNA,用PCR扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体pET22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3).诱导表达产物经金属螯合层析纯化,用SDS-PAGE进行分析.结果 已成功地克隆了艰难梭菌细胞毒素B羧基末端重复区域的1 848 bp的基因,经双酶切、PCR和测序鉴定,插入到载体的基因与GenBank中公布的艰难梭菌VPI10463 ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的 基因表达产物的相对分子质量为71 300,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的14%,包涵体占沉淀的82.7%,纯化后可溶性蛋白浓度为0.781 mg/ml.结论 所构建的含艰难梭菌ToxinB3基因的pET22b(+)CDB3重组质粒能高效表达目的 基因.金属螯合层析纯化重组蛋白CDB3的方法简便,特异性好.

关键词：艰难梭菌、细胞毒素B、功能区、羧基末端

所属期刊栏目：20

分类号：R3(基础医学)

资助基金：广东省广州市科技计划026G2434

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：29-32