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10.3969/j.issn.1004-5503.2007.01.006

人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

引用
目的 克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体.方法 将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109.挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白.结果 在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22.3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%.Western blot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性.通过Ni2+-NTA亲和柱,从1 L诱导产物中纯化出约15~20 mg重组蛋白,纯度在80%以上.结论 已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础.

热休克蛋白、基因克隆、原核表达

20

Q5(生物化学)

中国博士后科学基金2003033120

2007-03-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共4页

22-24,28

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中国生物制品学杂志

1004-5503

22-1197/Q

20

2007,20(1)

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