靶向高迁移率族蛋白A1基因RNA干扰真核表达载体的构建

摘要：

目的 构建针对人高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究HMGA1基因在肿瘤细胞中的作用奠定实验基础.方法 设计合成特异性针对人HMGA1基因的寡核苷酸序列,梯度退火后,与pU6mRFP载体连接,构建重组载体,转染人肝癌细胞SMMC-7721.通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光,估测转染效率,RT-PCR法检测转染细胞HMGA1 mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 DNA测序证实,成功构建了特异性HMGA1 siRNA真核表达载体,转染后72 h,转染效率为40%左右.所构建的载体能够特异性沉默转染细胞HMGA1基因的表达.转染细胞HMGA1基因沉默后,细胞凋亡率(27.86%±2.44%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为2.82%±2.39%和2.04%±0.70%),G0-G1期细胞百分数(77.73%±1.78%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为42.19%±3.28%和39.23%±3.63%),G2-S期细胞百分数(22.27%±1.78%)明显低于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为57.81%±3.28%和60.77%±3.63%).结论 成功构建了HMGA1的RNA干扰真核表达载体.

关键词：RNA干扰、高迁移率族蛋白A1、真核表达

所属期刊栏目：20

分类号：Q5(生物化学)

资助基金：吉林省科技厅科研项目200505142

在线出版日期：2007-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-4