重组Thermus thermophilus DNA聚合酶表达纯化及其在RT-PCR中的应用

摘要：

目的研究重组Thermus thermophilus DNA聚合酶的表达、纯化和应用.方法提取Thermus thermophilus hb8基因组DNA作为模板,PCR扩增Tth DNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-Bind Quick Cartridge 300纯化重组Tth DNA聚合酶His-tag融合蛋白.提取Thermomonospora fusca总RNA,用一管法RT-PCR扩增E2 cd基因,检测重组Tth DNA聚合酶RT-PCR活性.结果大肠杆菌表达Tth DNA聚合酶,分离出的电泳纯重组Tth DNA聚合酶His-tag融合蛋白相对分子质量为94 000,表达产量为200 000 U/L.一管法RT-PCR可扩增出850 bp长度的E2 cd基因.结论重组Tth DNA聚合酶已成功地表达和纯化,并用于RT-PCR.

关键词：Thermus thermophilus、DNA聚合酶、RT-PCR

所属期刊栏目：19

分类号：Q5(生物化学)

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：362-364