人乳头瘤病毒16型L1/E7嵌合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要：

目的克隆人乳头状瘤病毒16型(HPV16)L1/E7嵌合蛋白基因,并在毕赤酵母中表达.方法PCR扩增HPV16 L1/E7基因,并克隆至毕赤酵母表达载体pPIC-3.5K和pPIC-9K中,构建含HPV16 L1/E7基因的pPIC3.5K-HPV16 L1/E7和pPIC9K-HPV16 L1/E7重组表达载体,经测序证实插入的外源基因读码框正确后,分别转入GS115和KM71菌株中,筛选阳性转化菌株,经PCR鉴定,甲醇诱导表达HPV16 L1/E7嵌合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,电镜观察,并经离心法纯化VLPs.结果HPV16 L1/E7基因已成功插入pPIC-3.5K和pPIC-9K载体中,共获得6株KM71 HPV16 L1/E7-pPIC3.5K、5株GS115 HPV16 L1/E7-pPIC3.5K、1株KM71 HPV16 L1/E7-pPIC9K和2株GS115 HPV16 L1/E7-pPIC9K阳性转化菌株,并可表达相对分子质量约为69 000的蛋白,与预期值一致.表达量约为0.35～1.04mg/ml.Western blot显示该蛋白可与抗-HPV16 L1蛋白和抗-HPV16 E7蛋白的单克隆抗体特异性结合.在透射电镜下可观察到VLPs的形成,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似.经纯化的目的蛋白纯度接近100%.结论已成功构建了pPIC3.5K-HPV16 L1/E7和pPIC9K-HPV16 L1/E7重组表达载体,阳性转化菌株可表达结构与野生型HPV16一致的VLPs.

关键词：人乳头瘤病毒、毕赤酵母、基因表达

所属期刊栏目：19

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：355-361