细菌内同源重组构建人p21WAF1基因重组腺病毒

摘要：

目的构建人p21WAF1基因重组腺病毒载体,并在293细胞中包装制备重组腺病毒.方法将人p21WAF1基因亚克隆连接到腺病毒转移质粒pshuttle-cmv,得到阳性重组转移质粒psh-p21.先将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183菌,筛选得到AdBJ5183菌,再将Pme Ⅰ线性化的psh-p21转化AdBJ5183菌,经细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdp21.经Pac Ⅰ和BstX Ⅰ酶切及PCR鉴定,将正确的重组腺病毒质粒pAdp21转染293细胞包装病毒,用RT-PCR和PCR鉴定重组腺病毒及其稳定性.结果所构建的重组腺病毒质粒pAdp21,经PCR鉴定,可扩增出约500 bp的片段,与预期大小相符.转染293细胞可包装成p21WAF1基因重组腺病毒,经电镜观察,具有典型的腺病毒特征.结论已成功地构建了重组腺病毒质粒pAdp21,并制备出重组腺病毒rAdp21.

关键词：腺病毒、同源重组、p21WAF1基因

所属期刊栏目：19

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：336-339