重组李斯特菌细胞溶解素LLO蛋白表达纯化及溶血活性鉴定

摘要：

目的克隆单核细胞增生症李斯特菌细胞溶解素O(LLO)基因hlyA,构建其原核表达系统,鉴定融合蛋白LLO的抗原性和溶血活性.方法采用PCR技术从Lm总DNA中扩增hlyA基因,与基因库中其它9株hlyA基因序列相比较.用pET30a载体构建LLO原核表达质粒pET30a-hlyA,在E.coli BL21(DE3)宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后,Western blot鉴定其抗原性.用人红细胞检测溶血活性.结果所克隆的hlyA基因PEST样结构与GenBank上9个菌株的相应氨基酸序列相比,最多有3个氨基酸替代.LLO融合蛋白在大肠杆菌中可高效表达,纯化后获得高纯度的重组蛋白,具有较高的抗原性.在酸性pH 5.5条件下,LLO溶血活性最大为1.41×104 HU/mg.结论已成功构建LLO原核表达系统,所表达的蛋白具有较高的抗原性和溶血活性.

关键词：单核细胞增生症李斯特菌、细胞溶解素O、克隆、表达、溶血活性

所属期刊栏目：19

分类号：TQ464

在线出版日期：2006-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：225-228