人s△BAFF的高效原核表达及纯化

摘要：

目的克隆TNF家族B细胞激活因子(B cell activating factor to the TNF family,BAFF)胞外区134～285(sBAFF134-285)氨基酸残基段缺失突变体(s△BAFF)的cDNA,并进行表达及纯化.方法以构建的重组质粒pUC19/sBAFF为模板,采用一步反向PCR法,扩增缺失编码sBAFF的142～160位氨基酸的核苷酸序列.经测序证实后,克隆入原核表达载体pQE-80L.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白.结果经一步反向PCR扩增后得到401 bp的DNA片段,该片段序列与GenBank报道的编码人△BAFF的胞外区(s△BAFF)cDNA序列一致.含s△BAFF的表达载体在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为18 000的蛋白质并以包涵体的形式存在,经Ni2+-NTA柱层析纯化后得到高纯度的目的蛋白.结论已成功地制备出人s△BAFF蛋白,为其功能的研究创造了条件.

关键词：TNF家族B细胞激活因子、cDNA克隆、原核表达

所属期刊栏目：19

分类号：R392-33

资助基金：中国科学院资助项目30370319 30400187

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：130-133