中国人MBL基因编码区的克隆与原核表达

摘要：

目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达.方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上.诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性.结果克隆得到长747 bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上.重组MBL相对分子质量约为36 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上.ELISA检测显示重组MBL A490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性.结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性.

关键词：甘露糖结合凝集素、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：18

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA2Z3509;河北省自然科学基金300377

在线出版日期：2005-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：273-276