人层粘连蛋白α4链LG1组件融合蛋白的表达

摘要：

目的表达重组人层粘连蛋白α4链LG1组件(Human Laminin Alpha4 LG1 Module,hLNα4LG1)蛋白并检测其抗原性.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG1的cDNA片段,用T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28a-LG1,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG1融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,并进行Western blot分析.结果已成功获得hLNα4LG1 cDNA序列,与GenBank中序列同源性为100%.12%SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG1总蛋白中出现一条相对分子质量为26 000的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达90%以上,且Western blot可特异地检测到目的蛋白所对应转移带.结论成功表达和纯化hLNα4LG1蛋白,且具有良好的抗原性,为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础.

关键词：人粘连蛋白、融合蛋白、表达

所属期刊栏目：18

分类号：Q51(蛋白质)

在线出版日期：2005-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：182-184