重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测

摘要：

目的建立人肝细胞生长因子α链(rhHGFα)高效原核表达体系.方法以pRC/CMV-hHGF为模板,扩增hHGFα cDNA,继以XhoI酶切为386和954 bp 2个片段,亚克隆入pBSKS,DNA测序后,将上述两个片段与pBV220连接,构建重组质粒.转化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),筛选高效表达菌株.分离包涵体,8 mol/L尿素溶解,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白,经MTT法检测活性.结果所克隆的hHGFα基因序列正确,筛选出高效表达菌株BY,经SDS-PAGE显示在相对分子质量52 000处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的25%.表达产物以不溶性的包涵体(IBs)形式存在,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用.结论已成功表达了rhHGFα蛋白,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础.

关键词：肝细胞生长因子、原核表达、活性

所属期刊栏目：18

分类号：R392

资助基金：山西省高科技开发项目20041316

在线出版日期：2005-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：19-22