弓形虫信号转导蛋白14-3-3的高效表达及免疫学诊断的初探

摘要：

目的构建弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的重组质粒,并在E.coli中高效表达,用于免疫学诊断.方法以限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGEM-T/Toxo-14-3-3,获得弓形虫信号转导蛋白14-3-3编码基因片段,插入载体pET28a,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,在非变性条件下纯化融合的表达产物,通过Westernblot和ELISA检测其特异的免疫反应性.结果所构建的弓形虫信号转导蛋白14-3-3(rToxo-14-3-3)在原核系统中的重组表达质粒,以6个His融合蛋白的形式得到高效表达,其表达量占细菌裂解液中总蛋白量的49.2%.该重组抗原经纯化能被弓形虫感染的人血清所识别.用rToxo-14-3-3作为抗原,ELISA检测弓形虫病具有高度的敏感性和特异性.结论rToxo-14-3-3在大肠杆菌中已得到高效表达,该重组抗原能有效检测弓形虫的感染,可用于弓形虫病诊断试剂盒的研制.

关键词：弓形虫、信号蛋白14-3-3、免疫诊断

所属期刊栏目：18

分类号：Q93(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30170841;安徽省自然科学基金98436329

在线出版日期：2005-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：12-15