人巨细胞病毒gB基因真核表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的克隆人巨细胞病毒(HCMV)gB基因并构建真核表达载体.方法根据Genebank中HCMV核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别加入BamH Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶位点,特异性扩增gB编码基因片段.TA克隆后经双酶切、PCR、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含HCMV gB编码基因的真核表达载体,转染COS7细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)检测该重组真核表达载体在COS7细胞中的表达.结果重组质粒经BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切成大小为5.0kb与2.7kb的片段,表明表达载体pcDNA3.1中插入了HCMV gB基因片段,测序结果表明读码框正确.重组表达载体pcDNA3.1/gB转染COS7细胞后,经IFA检测胞浆中可见黄绿色荧光.结论成功构建了pcDNA3.1/gB真核表达载体,并可在COS7细胞中表达.

关键词：人巨细胞病毒、真核表达载体、gB糖蛋白

所属期刊栏目：17

分类号：R394

在线出版日期：2004-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：284-286