抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素基因的克隆与表达

摘要：

目的扩增抗癌胚抗原单链抗体(CEA-ScFv),与绿脓杆菌外毒素(PE40)进行重组及原核表达,旨在进一步研究重组蛋白CEA-ScFv-PE40的靶向抗肿瘤作用.方法分别扩增抗癌胚抗原单链抗体的重链区、轻链区,用overlap PCR按照VH-VL的顺序连接,克隆至pMD18T载体中.再将VH-VL基因片段与含有PE40的表达载体pET28a连接,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达.结果经DNA测序,其结果与设计完全相符.SDS-PAGE分析,在相对分子质量66 000处可见明显表达带,表达量可占菌体蛋白总量的13%以上.免疫印迹表明重组蛋白具有PE40的抗原特异性.结论抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素的成功克隆与表达,为进一步研究其生物活性奠定基础.

关键词：抗癌胚抗原单链抗体、绿脓杆菌外毒素、克隆、表达

所属期刊栏目：17

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：133-135,141