应用pET系统表达rhIFN-α2b基因的研究

摘要：

目的以构建的pET28a为表达载体,探讨人IFN-α2b基因在pET系统中的表达.方法合成引物,通过PCR扩增人IFN-α2b基因并引入点突变,在不改变天然IFN-α2b氨基酸序列的前提下,使原IFN-α2b基因4个大肠杆菌稀有密码子改变为偏爱密码子,在起始密码子后,编码前16个氨基酸的碱基序列均成为大肠杆菌的偏爱密码子.将PCR产物次级克隆入pET28a载体,构建重组表达载体pET28a-IFN-α2b.筛选正确的重组表达质粒pET28a-IFN-α2b转入感受态表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,粗提并检测IFN-α2b活性.结果重组质粒pET28a-IFN-α2b在宿主菌BL21(DE3)中表达出的rhIFN-α2b以可溶性蛋白形式存在于粗提上清液中,与原来pBV889系统表达的干扰素相比,具有更高的生物学活性.结论应用pET表达系统可表达出具有更高生物学活性的rhIFN-α2b蛋白.

关键词：rhIFN-α2b pET28a载体、点突变、偏爱密码子

所属期刊栏目：16

分类号：R9(药学)

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：147-150