生长抑素基因在大肠杆菌pThioHis表达系统中的克隆与表达

摘要：

目的在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素(SS)基因.方法以天然SS的氨基酸和基因序列为标准,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点,头部:KpnI和NcoI;尾部:Pst I(这一酶切位点可与Nsi I的切口互补).克隆至pThioHis A质粒的KpnI/Pst I酶切位点后,再克隆至pThioHis A质粒的Kpn I/Nsi I酶切位点,使SS基因分别位于多克隆位点的尾部和前部.结果重组质粒经酶切鉴定和基因序列测定证明,基因完全正确,在大肠杆菌TOP10中均得到较好的表达,IPTG诱导后4h表达量基本达到最高(37℃);在A600 0.4～1.5之间用IPTG诱导均可获得到较好的表达,但以0.6左右为最佳诱导时机;在LB、TB和2YT培养基中表达量依次为:TB＞LB＞2YT;表达的SS融合蛋白基本为水溶性的,具有良好的SS抗原性和免疫原性.结论为基因工程SS大肠杆菌疫苗的研制奠定了基础.

关键词：生长抑素、基因克隆、基因序列测定、基因表达、SS融合蛋白

所属期刊栏目：16

分类号：R392

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：19-23