人IL-10 cDNA克隆、表达及其生物学活性

摘要：

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10(Human Interleukin 10,hIL-10).方法用RT-PCR自白血病细胞株K562 RNA扩增hIL-10 cDNA片段(约500bp),克隆至质粒载体pSK(+),并对克隆的DNA片段进行序列分析.用限制酶EcoRI和BamHI消化pSK/IL-10重组质粒,分离hIL-10片段,并插入原核表达载体pBV220的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pBV/IL-10.转化菌株经42℃诱导,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白.表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.结果 RT-PCR扩增的DNA片段与hIL-10 cDNA大小一致.重组质粒pSK/IL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18000,其表达量达菌体总蛋白的20%左右.Western blot分析显示,重组蛋白能特异性地与抗hIL-10抗体结合,复性的重组蛋白能明显抑制PBMC合成IFN-γ.结论已成功地构建了表达具有生物学活性的重组hIL-10(Recombinant hIL-10,rhIL-10)的工程菌株.

关键词：白细胞介素10、克隆、表达、大肠杆菌、生物学活性

所属期刊栏目：15

分类号：R516(传染病)

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：321-324