应用Pcyb1载体表达胰高血糖素

摘要：

目的研制基因工程胰高血糖素.方法利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序.检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域(CBD)组成的融合蛋白表达量,确定工程菌表达最适条件.利用几丁质结合柱进行亲和层析,在DTT作用下由intein在柱上进行自我切割,纯化胰高血糖素.SDS-PAGE检测融合蛋白表达量,SDS-PAGE在Tris-Tricine缓冲系统中电泳检测纯度,Lowry法检测蛋白质含量,Western blot检测免疫原性,升血糖实验检测活性并进行N-末端测序.结果 DNA测序显示表达产物基因序列正确,纯化胰高血糖素具有免疫原性和生物学活性,N-端15个氨基酸与天然产品相同,电泳呈单一谱带,产率为1.25mg/L.结论获得分泌胰高血糖素基因工程菌,适于快速大规模生产.

关键词：重组胰高血糖素、Intein-CBD

所属期刊栏目：15

分类号：R392

资助基金：国家留学基金委资助项目;吉林省长春市科技发展基金

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：269-271