人睫状神经营养因子基因克隆、表达、纯化及其生物活性

摘要：

目的克隆人睫状神经营养因子(hCNTF)基因,在大肠杆菌宿主系统中高效表达并纯化,获得具有生物活性的hCNTF蛋白.方法以人染色体DNA为模板,经PCR扩增到编码CNTF成熟蛋白的cDNA序列,并克隆进原核表达载体pBV220,在大肠杆菌BL21(Gold)中进行表达,产物经CM-Sepharose FF柱纯化后,以体外培养的鸡胚背根神经节(DRG)测定生物活性.结果重组表达质粒pBV220-CNTF在大肠杆菌BL21(Gold)中获得了非融合的稳定、高效表达,目的蛋白占细胞总蛋白的45%左右,以可溶性和包涵体两种形式存在,表达上清及包涵体复性后经CM柱一步纯化纯度达90%以上;表达的重组hCNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长.结论基因工程rhCNTF的获得为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定基础.

关键词：人睫状神经营养因子、原核表达、背根神经节、生物活性

所属期刊栏目：15

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：155-158