应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

摘要：

目的制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的含硒单链抗体酶.方法利用RT-PCR方法从杂交瘤细胞株2F3中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因.经DNA序列测定后,构建成表达载体pTMF-scFv,经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变,得到含硒单链抗体酶.结果将重组质粒pTMF-scFv分别转化入大肠杆菌JM109(DE3)、BL21(DE3)和BL21(coden plus),表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的5%～10%、15%～20%和25%～30%.该重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为30000.其GPX活性为3 400U/μmol,接近天然酶水平.结论为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础.

关键词：单链抗体、包涵体、谷胱甘肽过氧化物酶、硒、化学突变

所属期刊栏目：14

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划103-13-01-05;国家自然科学基金20072010

在线出版日期：2004-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：87-90