恶性疟原虫多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1的中试规模制备与鉴定

摘要：

中试规模高效制备恶性疟原虫多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1,并对其免疫原性进行鉴定.20 L培养基规模发酵培养M.RCAg-1的工程菌,产物经高压匀浆破碎后,通过镍琼脂糖凝胶FF层析和琼葡糖凝胶G200HP层析两步分离纯化获得中试M.RCAg-1.将15只BALB/c小鼠随机地平均分为3组(弗氏佐剂组、中试M.RCAg-1与弗氏佐剂配伍组和小试M.RCAg-1与弗氏佐剂配伍组)进行皮下免疫,利用间接Elisa和间接免疫荧光(IFA)技术对3次免疫后小鼠血清中的特异性抗体进行分析.IPTG诱导4h后发酵结束,菌体产量25 g/L,M.RCAg-1约占菌体总蛋白的24％;经两步柱层析分离纯化后,目的蛋白纯度大于95％,回收率高达53.2％;与弗氏佐剂对照组相比,中试M.RCAg-1和小试M.RCAg-1都能在小鼠体内诱生高水平的特异性抗体应答,其抗体滴度均可达到1∶1 024 000.与此同时,两实验组鼠血清抗体的对疟原虫天然抗原都有识别,其识别水平并无差异(P＞0.05).本研究成功地高效制备出多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1,并在小鼠体内证实其具有良好的免疫原性,为随后进行的M.RCAg-1的临床前研究奠定基础.

关键词：恶性疟原虫、蛋白疫苗、中试发酵、免疫原性

所属期刊栏目：33

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：国家高技术研究发展863计划2012AA02A406

在线出版日期：2014-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：329-334