新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化

摘要：

工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性.利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa).通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化,并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhG-CSFa进行纯度分析.利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价.结果表明,rhG-CSFa表达量占全菌蛋白的31.2％,通过优化复性条件,rhG-CSFa复性率达到11.36％,纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11％.体外活性实验显示,与野生型G-CSF相比,rhG-CSFa在相同浓度下能诱导NFS -60细胞株获得更高的细胞增殖率.rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa,可用于工业化大规模生产,生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度.rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础.

关键词：重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、发酵、复性、纯化、生物活性

所属期刊栏目：31

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项2009ZX09102-250

在线出版日期：2012-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：552-557