转宿主粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)增效蛋白基因的克隆表达及活性

摘要：

以东方粘虫为转宿主增殖的颗粒体病毒(PuGV-Ps) DNA为模板通过PCR反应扩增出一条2.7 kb的特异性基因片段,纯化的PCR产物克隆到载体质粒pET-15b中,构建重组质粒pET-15b-En,重组质粒外源基因测序证明PCR扩增产物是粘虫颗粒体病毒转宿主病毒PuGV-Ps增效蛋白的全长基因.与原始美洲粘虫颗粒体病毒(PuGV)增效蛋白基因的序列比较,两者同源性达99.59％.11个突变碱基中有7个集中在5’端下游500 bp,而3’端上游500 bp仅1个碱基发生突变.PuGV-Ps增效蛋白基因重组质粒pET-15b-En转化到大肠杆菌中构建重组菌,在IPTG诱导下表达了108 kD的表达产物,Ni2+柱纯化证明表达产物是目标增效蛋白.LB培养液中加入0.2％的葡萄糖后有利于增效蛋白基因的表达.生物测定结果表明,粗提的表达产物具有增效活性,可以提高Btδ-内毒素对棉铃虫、甜菜夜蛾的敏感性.

关键词：转宿主粘虫颗粒体病毒、增效蛋白、克隆表达、生物测定

所属期刊栏目：29

分类号：S476.13;Q785(各种防治方法)

资助基金：国家自然科学基金31071740,30901246;江苏省自然科学基金BK2010295;公益性行业农业科研专项201103021;江苏省农业三新工程SX-2011-051

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：389-394