人mir-7-3基因慢病毒表达载体的构建
背景与目的:研究发现,miR-7对胶质瘤细胞的增殖分化有重要影响,本实验构建mir-7-3基冈慢病毒表达载体,为进一步研究mir-7.3基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用提供基础.方法:采用PCR技术从含有mir-7-3基因的质粒pENTR-MIRNA VECTOR扩增目的基因mir-7-3,并将基凶克隆到慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-RNAi VECTOR”含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因中,构建慢病毒载体表达质粒Lenti-GFP-mir-7-3,酶切、测序验证mir-7-3基因后,将knti-GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV,pMDIg-pRRE,pMD2G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞.获得携带mir-7-3基因和EGFP基冈的重组慢病毒FTV-CMV-EGFP-mir-7-3,取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞.荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达.结果:CLenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FIV-CMV-EGFP-mir-7-3.荧光显微镜下能直接观察到ECFP,FIV-CMV-EGFP-mir-7-3中携带有正确的mir-7-3基因,.结论:成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;为进一步从分子水平探讨mir-7-3基因治疗胶质瘤奠定了基础.
mir-7-3、慢病毒载体、绿色荧光蛋白、胶质瘤
08
R739.41(肿瘤学)
2011-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
238-240
