顺铂耐受胶质瘤细胞株诱导和细胞自噬的观察

摘要：

背景与目的:明确胶质瘤耐药相关分子机制,有助于寻找新的治疗对策.我们将诱导对顺铂耐药的脑胶质瘤细胞株,探讨细胞自噬和胶质瘤细胞顺铂耐受的关系.方法:应用人胶质瘤细胞株U251,采用顺铂剂量梯度爬升筛选方法,诱导耐药胶质瘤细胞株;用MTT法测定该耐药细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50);电镜和GFP-LC3荧光染色检测细胞内自噬体;AnnexinV-FITC染色检测细胞凋亡;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1以及凋亡分子Caspase-3水平.结果:我们诱导获得的耐药胶质瘤细胞株U251/CP2对顺铂半数抑制浓度(IC50)较亲代U251增加了62.7倍(分别是1.2±0.4 ìg/ml和76.5±22.5 μg/ml).电镜和GFP-LC3荧光染色观察表明胶质瘤细胞呈现典型的自噬特征,表现为电镜下广泛的自噬性空泡的出现和GFP-LC3斑点状分布,且能够被自噬抑制剂3-MA和ERK抑制剂PD98059抑制.凋亡检测表明,经顺铂处理后,U251/CP2较U251凋亡率低,3-MA和PD98059能够显著增强顺铂对U251/CP2的凋亡诱导作用.Western blot检测表明,U251/CP2较U251具有显著上调的LC3和Beclin 1水平,而Caspase-3水平较低.结论:U251胶质瘤细胞能够通过自噬作用保护细胞免受化疗药物顺铂的杀伤,从而免于发生细胞凋亡.

关键词：胶质瘤、化疗耐受、顺铂、自噬

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分类号：R730.264;R657.3;R329.25

资助基金：国家自然科学基金;华南肿瘤学国家重点实验室基金

在线出版日期：2008-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：246-250