胰酶限时消化在嗅鞘细胞培养中的运用

摘要：

目的 探索出一套高效、实用的大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方案.方法 分离SD大鼠嗅球的外两层组织,剪切消化成细胞悬液进行接种.采用3种方法进行OECs的培养和纯化:(1)A组分别经6h、24 h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右消化重悬细胞进行爬片分析.(2)B组分别经6h、24 h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右经胰酶限时消化,留成纤维细胞于瓶壁,重悬的细胞进行爬片分析.(3)C组采用经典的Nash法(分别经18 h、36 h两次差速贴壁去除杂质细胞),培养至11d左右消化重悬细胞进行爬片分析.采用NGFRP75与碘化丙啶(PI)双染的方法进行OECs的鉴定和纯度分析.结果 在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,OECs多数突起细长,呈双极或三极,少量呈单极或多极.A、B、C组所纯化的OECs纯度分别为(67.3±6.2)％、(83.7±7.7)％和(74.6士9.5)％,3组间比较有统计学差异(F=13.633,P＜0.01),B组所得OECs纯度均较另两组高(P＜0.05).结论 经6h、24 h两次差速贴壁十胰酶限时消化可以获得较高纯度的OECs,能够满足动物实验的需要.

关键词：嗅鞘细胞、细胞培养技术、差速贴壁、胰酶限时消化

所属期刊栏目：18

分类号：Q813.1(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：425-427,443