糖皮质激素受体α同型ELISA定量检测方法的建立

摘要：

目的 建立一种灵敏的定量检测人外周血单个核细胞(PBMC)细胞浆和细胞核内糖皮质激素受体α同型(GRα)的生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABS-ELISA)方法.方法 分别提取人PBMC细胞浆和细胞核总蛋白,用GRα纯品或总蛋白浓度相等的细胞提取液包被酶标板,加入针对GRα的特异性兔抗人多克隆抗体(一抗)和山羊抗兔IgG(二抗),应用生物素-亲和素系统(ABS)进行放大,采用多因素棋盘滴定方法确定最佳实验条件,用GRα纯品建立ELISA标准曲线,定量检测GRα的含量.结果 该研究确定应用0.1 mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)包被GRα纯品或细胞提取液,一抗浓度500 ng/100 μL,二抗浓度400 ng/100 μL,使用ABS放大系统,以TMB作为辣根过氧化物酶(HRP)的底物,于450 nm处检测吸光度值.该ABS-ELISA方法灵敏度为1 μg/L,工作浓度范围1～100 μg/L,批内变异系数(CV)为5.0%～6.9%,批间CV为7.1%～9.6%,不同操作者批内和批间的CV分别为4.7%和6.2%,均在实验允许范围内,可重复性良好.另外,该法无明显交叉反应,有一定特异性.结论 该研究建立了一种特异性高、可重复性好、敏感、快速、简便的定量测定PBMC细胞浆和细胞核内GRα的新方法,对进一步探讨自身免疫病的激素疗效与患者GR的关系等方面具重要价值.

关键词：酶联免疫吸附试验、糖皮质激素受体、同型、外周血单个核细胞

所属期刊栏目：13

分类号：R741.02;R446.11(神经病学与精神病学)

在线出版日期：2006-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：289-293