蜂毒肽基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步鉴定

摘要：

目的 通过pGEX-2T原核表达载体表达蜂毒肽.方法 将人工合成整合了肠激酶作用位点的蜂毒肽基因,插入载体pGEX-2T,构建蜂毒肽与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达栽体pGEX-MEL.重组质粒转化E.coli BL21(DE3)诱导袁达,超声破碎菌体,SDS-PAGE检测蛋白表达情况,取超声上清,通过GST亲和色谱系统纯化目的融合蛋白,酶切通过溶血实验检测其溶血活性.结果 SDS-PAGE结果显示,表达了相对分子质量约为30 000的融合蛋白,目的融合蛋白量约占菌体总蛋白量的29.5%.经Western blot鉴定,表达的GST融合蛋白与GST抗体有强烈的交叉反应,说明成功表达了目的融合蛋白.取超声上清,亲和色谱纯化融合蛋白,纯度为95%.肠激酶切割得到了人工天然蜂毒肤,测定蜂毒肽回收率为80%.结论 通过原核表达系统成功表达蜂毒肽,具有和天然蜂毒相同的溶血活性.

关键词：蜂毒肽、大肠杆菌、表达、纯化

所属期刊栏目：31

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展计划项目20060564

在线出版日期：2010-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5