人血管内皮细胞生长因子基因克隆、表达与纯化

摘要：

目的研究人血管内皮细胞生长因子121(hVEGF121)基因在pET-24a(+)中的表达,获得高效表达、具有生物学活性的rhVEGF121.方法提取人原髓白血病细胞(HL60)总RNA,RT-PCR扩增hVEGF121基因,经DNA序列分析后,克隆于高效原核表达载体pET-24a(+),并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,超滤复性,DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换和Sephacry S-100分子筛色谱纯化后,以HUVEC测定其生物学活性.结果SDS-PAGE结果显示,目的蛋白质以包涵体形式存在,表达量达菌体总蛋白质的20%,纯化后rhVEGF121纯度达95%以上,生物学活性检测证实,具有刺激HUVEC增殖的功能.结论在原核系统中实现了hVEGF121的高效表达.

关键词：血管内皮细胞生长因子、基因克隆、表达、纯化

所属期刊栏目：26

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省广州市科技攻关项目2003Z2-E0171;广东省科技厅科技计划2004B31201010;军队科研项目04LX028

在线出版日期：2005-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：135-138