培养基pH值与提纯方法对大肠杆菌表达rhGM-CSF产率的影响

摘要：

目的为了提高大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的产率，对影响工程菌生长、产物表达和产物提纯等因素进行探索。方法设计3种pH值培养基，以菌得率、表达率为指标，观察pH对工程菌生长和表达的影响。以包涵体得率、纯度和产品得率、纯度、活性为指标，观察表达产物提纯各步对产率的影响。用SDS-PAGE薄层扫描法测定包涵体和产品纯度。用TF1细胞MTT法测定产品rhGM-CSF活性。结果 pH7.0培养基最好，菌得率2.22 g/L，表达率为23%，比其它pH值培养基约高1倍。菌体不经冻存处理即进行破菌制备包涵体，得率可提高2.5倍。在rhGM-CSF复性步中，复性液中加入少量PEG 4000，可提高复性率0.8倍。采用优化条件制备大肠杆菌rhGM-CSF，可提高产率约8倍。结论影响大肠杆菌表达rhGM-CSF产率的因素较多，优化培养、表达、纯化各步的条件，均可大幅度提高产率。

关键词：重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、发酵、pH、复性、纯化

所属期刊栏目：22

分类号：R392-33;R973

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：78-79