褐飞虱两个dynamin-1-like基因的克隆、多克隆抗体制备及表达定位

摘要：

[目的]研究dynamin-1-like的两个基因NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中的生物学功能.[方法]通过聚合酶链式反应扩增褐飞虱dynamin-1-like的两个基因,并对其生物信息学进行分析.通过荧光定量PCR技术(qPCR)检测了这两个基因在褐飞虱不同组织和不同发育阶段中的相对表达量.构建原核表达载体,在表达菌株Rosetta中诱导重组目的蛋白的表达.通过Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,并将纯化得到的蛋白免疫新西兰大白兔,得到多克隆抗体,并用ELISA检测抗体效价,Western blotting检测抗体特异性.利用上述抗体,通过免疫荧光实验观察目的蛋白在褐飞虱卵巢中的表达和定位.[结果]克隆并鉴定了两个dynamin-1-like基因,分别命名为NlDNM1L-1和NlDNM1L-2(GenBank登录号分别为KY082900、KY082901).系统进化树表明,NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在半翅目昆虫中较为保守.蛋白结构预测和基因时空表达分析说明,NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中可能有着不同的功能.ELISA和Western blotting结果表明,制备的NlDNM1L-1和NlDNM1L-2多克隆抗体效价高、特异性好.免疫荧光实验结果显示,NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱卵巢滤泡细胞中普遍表达,可能与褐飞虱卵巢发育和成熟有关,它们也可能与类酵母共生菌入侵褐飞虱卵巢有关.[结论]获得了NlDNM1L-1和NlDNM1L-2基因序列,了解了其基本的生物信息,并阐明了其时空表达特征;成功制备其多克隆抗体,并初步了解了NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱卵巢中的表达和定位.这些结果为深入研究NlDNM1L-1和NlDNM1L-2在褐飞虱中的功能奠定了基础.

关键词：褐飞虱、Dynamin-1-like、基因克隆、表达模式、原核表达、多克隆抗体、表达定位

所属期刊栏目：31

分类号：Q755;S435.112+.3(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31501632;浙江省自然科学基金资助项目LQ14C140006;国家 973 计划资助项目2012CB114105

在线出版日期：2017-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：345-354