水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白在水稻原生质体内的表达

摘要：

[目的]水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体,是RRSV侵染介体所必需.然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道.[方法]利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体;通过水稻原生质体病毒侵染体系,利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在水稻原生质体内的分布情况,利用实时定量PCR技术和Western blot技术分别检测Pns10 RNA和Pns10蛋白在水稻原生质体内的积累情况.[结果]将Pns10基因克隆到Gateway系统原核表达载体pDEST17中,IPTG诱导表达成功后,制备融合蛋白抗血清.Western blot检测显示,该抗血清可检测感病水稻叶片中的Pns10蛋白.病毒侵染水稻原生质体后,Pns10蛋白可形成类似病毒原质的内含体;Pns10 RNA在病毒接种8 h后开始积累,24 h后达到最大值,随后开始下降;Pns10蛋白在24 h后开始表达,之后维持较高水平,60 h后略有下降.[结论]成功获得了Pns10抗血清;Pns10在水稻原生质体内成功表达,可形成类似病毒原质的内含体,并且Pns10 RNA的表达先于其蛋白的表达.

关键词：水稻齿叶矮缩病毒、水稻原生质体、Pns10抗体、Pns10RNA、Pns10蛋白

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分类号：Q786;S435.111.4+9(基因工程（遗传工程）)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20133515120004;国家自然科学基金资助项目31301640;福建教育厅科技项目JA13103

在线出版日期：2017-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：232-237